你好,歡迎來到中華試劑網(wǎng) 購試劑 買耗材! [請(qǐng)登錄][注冊(cè)有驚喜]

      貨號(hào)快速下單 | 簽到送積分   | 會(huì)員中心 | 客服熱線:400-021-2765

      吸水鏈霉菌FC904原生質(zhì)體形成的影響因素

      2021/3/22 13:17:05  作者:中華試劑網(wǎng)


      目的:探討吸水鏈霉菌FC904S.hygroscopicus FC904)原生質(zhì)體形成的影響因素。方法:用溶菌酶處理S.hygroscopicus FC904的菌絲體,比較在不同條件下原生質(zhì)體的形成數(shù)。結(jié)果S.hygroscopicus FC904在不同條件下原生質(zhì)體的形成數(shù)不同,其原生質(zhì)體形成的最適條件為:在菌絲體生長(zhǎng)培養(yǎng)基中添加0.7%甘氨酸及10%的蔗糖;采用生長(zhǎng)旺盛期的菌絲體制備原生質(zhì)體;溶菌酶適宜濃度為2mg/ml;溶菌溫度范圍3037℃;溶菌前每毫升壓積菌絲體宜用P緩沖液5ml懸浮。結(jié)論:菌絲體生長(zhǎng)培養(yǎng)基成分、菌齡、溶菌酶濃度、溶菌溫度是影響S.hygroscopicus FC904原生質(zhì)體形成的主要因素。

        關(guān)鍵詞:吸水鏈霉菌FC904 原生質(zhì)體 制備

        新型強(qiáng)效免疫抑制劑雷帕霉素以其強(qiáng)效低毒而備受世人注目。吸水鏈霉菌FC904S.hygroscopicus FC904)是福建省微生物研究所分離的能產(chǎn)生雷帕霉素的菌株。本文摸索該產(chǎn)生菌原生質(zhì)體形成的最適條件,為進(jìn)一步進(jìn)行誘變育種、原生質(zhì)體融合以及遺傳學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1 菌株 S.hygroscopicus FC904

        1.2 菌絲體培養(yǎng)基 由葡萄糖,酵母膏,蛋白胨,K2HPO4·3H2OMgSO4·7H2O組成。

        1.3 主要試劑 甘氨酸(上海新華化工廠),溶菌酶(上海伯奧生物科技公司),原生質(zhì)體緩沖液(P緩沖液)按文獻(xiàn)[1]配制。

        1.4 原生質(zhì)體制備

        在菌絲體生長(zhǎng)培養(yǎng)基中添加10%蔗糖及0.7%甘氨酸,移種入孢子斜面培養(yǎng)物,于26℃振蕩培養(yǎng)(200r/min4246h;離心收集菌絲體,加入P緩沖液洗滌菌絲體兩遍,每遍離心(3000r/min10min,棄上清液;每毫升壓積菌絲體加入P緩沖液5ml懸浮;加入溶菌酶(P緩沖液配制,25nm纖維微孔濾膜過濾,終濃度2mg/ml,3037℃作用60min,其間每隔15min用無菌吸管吹打以利原生質(zhì)體釋放,并取樣用顯微鏡觀察原生質(zhì)體形成情況。酶解結(jié)束用差速離心除去未酶解菌絲體,過濾收集原生質(zhì)體,用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù),比較在不同因素下原生質(zhì)體的形成數(shù)。

        2 結(jié) 果

        在添加有甘氨酸及蔗糖的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌絲體有利于制備原生質(zhì)體,其濃度以甘氨酸0.7%及蔗糖10%最為適宜。不同菌齡的菌絲體對(duì)溶菌酶的敏感度不同,處于生長(zhǎng)旺盛期(菌齡4246h)的菌絲體最有利于該菌株原生質(zhì)體的形成。適合于該菌株原生質(zhì)體形成的溶菌酶濃度為2mg/ml,繼續(xù)提高溶菌酶濃度,原生質(zhì)體形成數(shù)不再提高。有利于S.hygroscopicus FC904原生質(zhì)體形成的適宜溫度范圍為3037℃。溶菌前的菌絲體密度也會(huì)影響溶菌效果,離心后每毫升壓積菌絲體宜加P緩沖液5ml懸浮(表1,2)。

      1 不同因素對(duì)S.hygroscopicus FC904原生質(zhì)體形成的影響

      影響因素

      平均原生質(zhì)體數(shù)(個(gè)/ml)

      甘氨酸+蔗糖濃度(%)

       

      0.1+1

      0

      0.5+5

      4.6×107

      0.7+5

      9.5×107

      0.7+10

      4.5×108

      0.7+20

      2.2×108

      菌齡(h

       

      2430

      0

      4246

      3.8×108

      5054

      3.0×105

      溶菌酶濃度(mg/ml)

       

      0.5

      0

      1.0

      6.5×105

      2.0

      4.1×108

      4.0

      4.6×108

      溶菌溫度(℃)

       

      26

      4.5×105

      30

      3.6×108

      37

       

      3.5×108

      2 菌絲體密度對(duì)S.hygroscopicus FC904原生質(zhì)體形成的影響

      菌絲體壓積∶P緩沖液體積

      平均原生質(zhì)體數(shù)(個(gè)/ml)

      1∶2

      7.7×105

      1∶5

      4.3×108

      1∶8

       

      4.8×108

        3 討 論

        原生質(zhì)體無細(xì)胞壁,有利于生化或遺傳操作。原生質(zhì)體的分離依賴于菌絲細(xì)胞壁在裂解酶中的降解,同時(shí)受菌絲體培養(yǎng)基的成分、菌齡、溶菌酶濃度及酶解溫度等因素的影響。由于不同微生物的遺傳及生理特征各不相同,因此,原生質(zhì)體的分離制備因種而異,必須摸索適合于各自菌株的最佳原生質(zhì)體形成條件。

        (1)在添加適當(dāng)濃度的甘氨酸及蔗糖的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌絲體有利于制備原生質(zhì)體。細(xì)胞壁肽聚糖中的四肽側(cè)鏈由L-丙氨酸、D-谷氨酸、L-賴氨酸和D-丙氨酸組成2,甘氨酸可以替代肽聚糖中的D-丙氨酸,從而影響細(xì)胞壁之間的相互交聯(lián),而蔗糖則可能會(huì)擾亂菌體生長(zhǎng)時(shí)的代謝過程3。因此,甘氨酸和蔗糖在抑制菌絲體生長(zhǎng)的同時(shí)也能提高細(xì)胞壁對(duì)溶菌酶的敏感性,在二者之間必須尋找一個(gè)適宜的濃度。對(duì)S.hygroscopicus FC904來說,菌絲體生長(zhǎng)培養(yǎng)基中添加0.7%甘氨酸與10%蔗糖,最有利于S.hygroscopicus FC904原生質(zhì)體的形成。

       ?。?span lang="EN-US">2)有報(bào)道太長(zhǎng)菌齡的菌絲壁易老化增厚,不利于原生質(zhì)體的釋放,太短菌體易破裂,原生質(zhì)體釋放量減少4。本文結(jié)果也表明菌齡適中,處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌絲體最有利于該菌株原生質(zhì)體的形成。

        (3)實(shí)驗(yàn)表明,溶菌酶濃度>2mg/ml、溶菌溫度3037℃都有利于制備原生質(zhì)體,但是最佳溶菌酶濃度及溶菌溫度應(yīng)盡可能選擇較低者,因?yàn)槿芫笣舛燃叭芫鷾囟仍礁撸|(zhì)體越不穩(wěn)定且易破裂,造成再生困難3。

        (4)溶菌前菌絲體密度太大也不利于溶菌,因?yàn)橥染康木z體在相同的溶菌酶濃度下,菌絲體密度越大,所用的溶菌酶量就越少。

      上一篇:益生枯草芽孢桿菌MA139增殖培養(yǎng)基的優(yōu)化 
      下一篇:變形桿菌屬、摩根氏菌屬和普雷威登氏菌屬細(xì)菌的危害評(píng)估報(bào)告

      主站蜘蛛池模板: 亚洲欧洲无码一区二区三区| AV无码精品一区二区三区| 国产精品一区三区| 秋霞无码一区二区| 亚洲片一区二区三区| 亚拍精品一区二区三区| 国产在线观看一区精品| 激情综合丝袜美女一区二区| 亚洲福利视频一区二区三区 | 韩国精品福利一区二区三区| 亚洲视频一区二区三区四区| 无码日韩精品一区二区免费暖暖| 国产一区二区精品久久岳| 无码一区二区三区免费| 一区二区三区视频免费观看| 日本一区中文字幕日本一二三区视频| 亚洲AV无码一区二区三区性色| 久久久久无码国产精品一区| 精品一区二区三区免费 | 国产精品特级毛片一区二区三区| 三上悠亚亚洲一区高清| 合区精品久久久中文字幕一区| 一区二区不卡视频在线观看| 一区二区三区在线播放视频| 中文字幕一区在线| 国产精品高清一区二区三区| 亚洲AV无码第一区二区三区| 中文字幕一区二区三区5566| 精品国产一区AV天美传媒| 亚洲av无码一区二区三区在线播放| 蜜桃AV抽搐高潮一区二区| 国产成人一区二区三区电影网站 | 中文无码一区二区不卡αv| 91视频一区二区三区| 国产成人一区二区精品非洲| 国产福利电影一区二区三区,日韩伦理电影在线福| 男人免费视频一区二区在线观看 | 99精品国产高清一区二区麻豆| 国产精品视频一区二区三区| 精品人妻无码一区二区色欲产成人 | 国产成人久久一区二区不卡三区|